Miksi?
- Sienirihmaston kloonaaminen pahvialustalla on helppoa, opettavaista ja hauskaa. Lisäksi voit jatkaa jo valmiiksi hyväksi toteamasi kannan kasvatusta siirtämällä pahvilta rihmastoa steriloituun jyväkasvualustaan tai edelleen agarille.
Mitä lajeja voin kloonata tällä menetelmällä?
- Psilocybe cubensis, osterivinokas ja muut yleiset ruokasienilajit.
Tarvikkeet
- Kannellinen muoviastia tai lasipurkki
- Micropore-teippiä tai tyvek-materiaalia
- Värjäämätöntä pahvia, kanamunakennojen pahvi mielestäni parasta tähän tarkoitukseen.
- Kloonattavaa rihmastoa, mieluiten varhaisessa kehitysvaiheessa oleva pinni.
- Katkoteräveitsi
- Sytytin
- Alkoholia ja talouspaperia
- Puhtaat kumihansikkaat
(Hanskalaatikko tai laminar flow hood, vapaaehtoinen)
1. Kasvatusastian valmistaminen
Tee kasvatusastian kanteen reikä, jonka halkaisija on noin 5 mm. Peitä tehty reikä micropore-teipillä tai tyvek-kankaalla. Tämä mahdollistaa kaasujen vaihtumisen rihmaston kasvun aikana. Pese kasvatusastiasi tämän jälkeen mahdollisimman kuumalla vedellä tai pyyhi 70 til-% etanolilla tai isopropanolilla. Sulje kasvatusastia.
2. Pahvin valmistelu
Leikataan munakennosta tasainen, noin 5 cm x 5 cm palanen pahvia. Jatketaan valitsemallasi tavalla. Suosittelen tapaa nro. 2.
Tapa nro. 1: Laitetaan pahvinpalanen siivilään ja huuhdotaan sitä hanan alla mahdollisimman kuumalla vedellä muutaman minuutin ajan. Puristetaan puhtailla kumihansikkailla ylimääräinen vesi pois ja asetetaan pahvi kasvatusastian pohjalle. Suljetaan kasvatusastia ja annetaan pahvin jäähtyä.
Tapa nro. 2: Nesteytetään pahvi ja laitetaan se kasvatusastiaan. Kasvatusastia peitetään foliolla. Steriloidaan painekeittämällä kasvatusastioita pahveineen n. 15-20 minuutin ajan. Annetaan jäähtyä painekeittämisen jälkeen.
3. kloonattavan rihmaston valitseminen ja kloonaaminen
Kuten tiedämme, sienten itiöemät koostuvat rihmastosta. Voimme hyödyntää tätä kloonatessamme sieniä. Etenkin in-vitro kasvaneet pinnit soveltuvat kloonaamiseen mainiosti, koska näissä kontaminaatioiden riski on kohtuullisen pieni.
3.1. Katkoteräveitsi steriloidaan kuumentamalla sitä sytkärillä. Tämän jälkeen odotetaan hetki sen jäähtymistä ja pyyhitään se alkoholilla kostutetulla talouspaperilla.
3.2. (Tämä vaihe voidaan suorittaa joko hanskalaatikossa, flow hoodin edessä tai ilman mainittuja apuvälineitä. Hanskalaatikon käyttöä suosittelen ehdottomasti.) Valitaan terveeltä vaikuttava pinni ja irrotetaan se kasvualustastaan katkoteräveitsellä. Tämän jälkeen siirretään pinni kasvatusastiaan pahvin päälle ja suljetaan sen kansi mahdollisimman nopeasti.
4. Kasvua odotellessa
Ensimmäiset merkit rihmaston kasvusta näkyvät parhaimmassa tapauksessa vuorokaden sisällä kloonaamisesta. Tässä kuvassa pahvi on valmisteltu tapaa nro. 1 käyttäen ja pinni on siirretty pahvin päälle tavallisessa huoneilmassa. Kloonaamisesta on kulunut kolme vuorokautta ja rihmaston kasvua on jo selkeästi havaittavissa.
[smg id=5124]
