2,5 viikkoa sitten inokuloitu vajaat 30 pf-tek purkkia, eikä yhdessäkään purkissa ole tapahtunut yhtään mitään rihmaston kasvuun viittaavaa. Nyt olisi tarkoitus tehdä uusi yritys, koska minulla on vielä yksi itiö printti jäljellä. Mutta ennen sitä ajattelin käydä prosessin vaiheittain läpi ja miettiä mikä meni pieleen, ettei tule toistettua samoja virheitä. Eli tämän kaavan mukaan etenin edelisesllä kerralla:

1. Itiöruiskun valmistaminen.

- Sterilisoin shotti lasin kattilassa. Sterilisoinnin jälkeen otin lasiin kiehunutta vettä ja peitin lasin foliolla. Annoin jäähtyä huoneen lämpöiseksi, jonka jälkeen rapsuttelin itiöt lasiin. Tein yhdestä printistä 4 kpl 20 ml:n itiöruiskua. Pumppasin veden ruiskuun ja takaisin lasiin useita kertoja tasaisen itiömäärän saamiseski ruiskuun. Tämän jälkeen ruiskut jääkaappiin kahdeksi vuorokaudeksi.

Mahdolliset virheet: En kyllä itse keksi tästä vaiheesta mitään virhettä

2. Pf Tek kakkujen tekeminen.

- Ihan perusreseptillä tein kakut eli suhteessa 1:1:2 (tumma riisijauho:vesi:vermikuliitti). Seoksen tekeminen onnistui minusta hyvin ja koostumus oli hyvä. Perustuen siis luetttuun tietoon, aikaisempaa kokemusta kun ei tästä asiasta ole.

- Tämän jälkeen foliot päälle ja kattilaan sterilisoitumaan. Kattilan pohjalla käytin metallisia purkkien kansia ja foliota, etteivät purkit olisi kosketuksissa veteen ja kattilan pohjaan. Purkit joita käytin:  http://sporewonder.nl/product/750/. Purkeissa yksi injektioportti / purkki: http://sporewonder.nl/product/self-sealing-injection-ports-pack-of-10/ . Sterilisoinnin jälkeen foliot pois ja purkit yön yli jäähtymään. Seuraavana päivänä inokulointi.

Mahdollisia virheitä: - Jotkut purkit ehkä olleet kosketuksissa kiehuvan veden kanssa ---> Olisiko purkin sisältö jotenkin pilaantunut?
                           - Olisiko purkkien filtteri kastuneet?

3. Inokulointi

- Jääkaapista ruiskut esille. Kunnon ravistelu ja sitten ruiskutelemaan. Jokaiseen purkkiin meni n. 2-3 ml itiövettä. Neljään reunaan jokaiseen purkkiin. Jokaisen purkin välissä neulan kuumentaminen sytkärillä (sattui olemaan ainut vaihtehto sillä hetkellä). Neulat oli isoimpia mitä apteekista löysin. Jopa liian järeitä. Itse neulan sisälläkin oli joku sisäosa, mikä piti poistaa. Oisko joku kanyylineula tai jotain. Inokuloinnin jälkeen purkit kaappiin. Olosuhteet ihan normaalit. Lämpötila n.21  astetta ja ilmankosteus nyt on mitä se normaali huoneessa on.

Mahdollisia virheitä: - Voiko neula olla jopa liian paksu ja kun se lämmitetään, se ei kerkeä jäähtyä itiöveden toimesta ja sitä kautta itiöt kuolevat?


Kaikki työvaiheet tein hanskalaatikossa ja steriileillä välineillä. Mahdolliset virheet ovat pelkkää spekulaatiota ja itse luulen , että  itiöprintti olisi ollut jo valmiiksi kuollut. Printit tilattu mushroom research centrestä.
 

Kohta alkaa  uusien kakkujen leipominen ja sitä ennen kaikki vinkit ovat tervetulleita.


                           

Talvella kun tuolta tilaa niin kylmyys tappaa itiöt. Suurimpana syynä postin lentokoneiden/junien kylmyys ja itiöpakettien huono eristys.   Tee tässä seuraavassa erässä kaikki samalla lailla niin pitäisi onnistua.  Mutta jos ei onnistu niin pyydä Klonkulta itiöitä. Itse sain Klonkulta aivan järjettömän kokoisen printin ja hyvin on toiminut

1. Itiöruiskun valmistaminen.

- Sterilisoin shotti lasin kattilassa. Sterilisoinnin jälkeen otin lasiin kiehunutta vettä ja peitin lasin foliolla. Annoin jäähtyä huoneen lämpöiseksi, jonka jälkeen rapsuttelin itiöt lasiin. Tein yhdestä printistä 4 kpl 20 ml:n itiöruiskua. Pumppasin veden ruiskuun ja takaisin lasiin useita kertoja tasaisen itiömäärän saamiseski ruiskuun. Tämän jälkeen ruiskut jääkaappiin kahdeksi vuorokaudeksi.                         

Mä olen steriloinut aina valmiin shottilasin (ilman itiöitä tietenkin). Eli vettä shottilasiin -> folio päälle -> kattilaan.
Näin saa paketin, josta puuttuu vain itiöt. Vähemmän vaiheita, joissa voi tapahtua virheitä.

- Tämän jälkeen foliot päälle ja kattilaan sterilisoitumaan. Kattilan pohjalla käytin metallisia purkkien kansia ja foliota, etteivät purkit olisi kosketuksissa veteen ja kattilan pohjaan.

En ole välittänyt siitä, että lasit/purkit olisivat osittain vedessä. Onko sillä jotain merkitystä?

Kuolleita itiöitä mäkin epäilen tässä tapauksessa.

Onko Tosiaan näin , että voin inokuloida samat purkit uudelleen?

Eikä tarvitse mitään toimenpiteitä? Luulisi esim kosteuden häviävän ajan saatossa tuolta purkeista yms...

Luulisi esim kosteuden häviävän ajan saatossa tuolta purkeista yms...

Mihimpä se kosteus lähes tiiviistä purkista häviää. Ideaalinen tilannehan olisi, että purkissa olisi vain kaasunvaihto, ja näinollen purkin sisällä oleva kosteus pysyisi purkin sisällä vesimolekyylien ollessa suurempia kuin kaasumolekyylien. Ja se kosteus mikä on mahdollisesti hävinnyt, niin tulee varmasti uudelleensteriloinnin myötä takaisin purkkiin.